silimarīna ekstrakcijas process
Silymarin (Silymarin), flavonolignānu maisījums, kas uzrāda daudzas farmakoloģiskas darbības, tiek iegūts no piena dadžu augļiem (Silybum marianum L. Gaertner). Sakarā ar augsto lipīdu saturu dadžu augļos, Eiropas Farmakopeja iesaka divsoļu procesu tās ekstrakcijai. Pirmkārt, augļi tiek attaukoti 6 stundas, izmantojot n-heksānu; otrkārt, silimarīnu ekstrahē ar metanolu vēl 5 stundas.
Iesniegtie dati liecina, ka šo ārkārtīgi ilgo tradicionālo Soxhlet ekstrakcijas procesu var saīsināt līdz dažām minūtēm, izmantojot zem spiediena spiestu šķidruma ekstrakciju (PLE). PLE arī ļauj likvidēt attaukošanas posmu, kas nepieciešams tradicionālajā procedūrā, tādējādi vienkāršojot silimarīna ekstrakcijas procedūru un novēršot silimarīna zudumus, ko izraisa attaukošana. PLE atgūstamības, kas iegūtas optimizētos ekstrakcijas apstākļos, ir acīmredzami labākas nekā tās, kas iegūtas Farmakopejas ieteiktajā Soxhlet ekstrakcijas procedūrā.
Silīkristīna, silīdidīna, silibīna A, silibīna B, izozīrbīna A un izozilibīna B PL iegūtās vērtības acetonā ir attiecīgi 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 un 1,5 mg/g neattaukotu augļu. 5-h Soxhlet ekstrakcija ar metanolu attaukotos augļos dod tikai ∼72% no silimarīna daudzuma, kas iegūts 10 minūšu PLE 125 °C temperatūrā.
Kas ir Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, ko parasti sauc parpiena dadzis, svētīts piena dadzis, Marian Thistle, Mary Thistle vai Saint Mary's Thistle, ir ikgadējs vai divgadīgs augs no Asteraceae ģimenes. Augs, kas sākotnēji aug Dienvideiropā un Āzijā, tagad ir atrodams visā pasaulē (1). Šīs apgrūtinošās nezāģēšanas pašlaik tiek audzētas kā ārstniecības augs, un tā ir viena no svarīgākajām ārstniecības kultūrām Eiropā.
Piena dadzis ir izmantots medicīniskiem nolūkiem vairāk nekā 2000 gadus, visbiežāk aknu slimību (cirozes un hepatīta) ārstēšanai, kā arī aknu aizsardzībai pret toksiskām vielām (2–5). Neseno pētniecības interesi par šo augu ir veicinājuši pētījumi, kas parāda tā ārkārtīgi augsto pretvēža aktivitāti. Ekstrakti no auga tagad tiek intensīvi pētīti vēža eksperimentālajā ķīmijterapijā un ķīmijterapijas blakusparādību uzlabošanā (6). Jaunākie ziņojumi ir parādījuši, ka ekstraktus no šī auga raksturo arī daudzas citas farmakoloģiskas darbības, piemēram, pretiekaisuma un antifibrotiska iedarbība (2, 7, 8).
Silymarin, flavonolignānu maisījums, kas uzrāda daudzas farmakoloģiskas darbības, tiek iegūts no piena dadžu (Silybum marianum L. Gaertner) sēklām. Līdz šim izmantotās kopējās procedūras silimarīna ekstrakcijai galvenokārt balstās uz lēnām augstas temperatūras šķīdinātāja ekstrakcijas metodēm. Ar šīm metodēm saistītie trūkumi ir noveduši pie jaunu alternatīvu ekstrakcijas procesu meklēšanas, kas papildus varētu uzlabotsilymarin ekstraktiKvalitātes. Pēdējais ir īpaši svarīgs attiecībā uz silīmarīna ināšanu. Iegūtie silimarīna ekstrakti faktiski var saturēt toksiskas organiskas atliekas, kas jānoņem, lai apmierinātu patērētāju pieņemamību.
Mēģinot uzlabot silimarīna ekstrakcijas procesu un padarīt to efektīvāku un videi draudzīgāku, nesen ir izstrādāta un piemērota arī šķīdinātāja ekstrakcija ar mikroviļņu palīdzību, šķīdinātāja ekstrakcija ar ultraskaņu, šķidruma ekstrakcija zem spiediena, fermentu atbalstīta ekstrakcija, superkritiska šķidruma ekstrakcija un īpaši subkritiska ūdens ekstrakcija, kas pazīstama arī kā zem spiediena veikta karstā ūdens ekstrakcijas metodes.
Materiāli un metodes
Augu materiāls
Žāvētus S. marianum L. Gaertner augļus 2011. gada rudenī iegādājās vietējā aptiekā (Ļubļinā, Polijā). Pietiekami liels reprezentatīvs augu materiāla paraugs (aptuveni 500 g) tika samalts un sijāts, lai iegūtu daļiņu izmēru 0, 4 mm. Ekstrakcijai tika izmantotas precīzi nosvērtas materiāla daļas.
Materiāli un reaģenti
Standartizētais sausais ekstrakts S. marianum L. Gaertner un silibīns B (ar tīrību 98%), ko piemēro kā standartus, tika iegādāts no Sigma-Aldrich, Polijā. Polijas Ķīmijas rūpnīcā (POCh, Gliwice, Polija) iepirka acetonu, etilacetātu, fosforskābi, n-heksānu (visi ar analītisko reaģentu) un metanolu (analītiskā reaģenta tīrības pakāpe un HPLC tīrības pakāpe). Ūdens tika attīrīts, izmantojot Milli-Q sistēmu no Millipore (Millipore, Bedford, MA, ASV). Neitrāls stikls, kas iegūts kā dāvana no vietējiem stiklapstrādes darbiem (frakcija 0,4–0,6 mm), tika uzklāts kā disperģēšanas līdzeklis PLE šūnā.
Šķidruma ekstrakcija zem spiediena
PLE tika izpildīts ar Dionex ASE200 instrumentu (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, ASV). Augu materiāls (0,5 g) tika sajaukts ar inertu materiālu (neitrāls stikls) un ievietots 22 ml nerūsējošā tērauda ekstrakcijas kamerā, kas satur filtrpapīru apakšā. Vēl viens filtrpapīra aplis tika novietots ekstrakcijas šūnas augšpusē. Visbeidzot, šūna bija cieši noslēgta un ievietota apkures krāsnī.
Šūnas saturs tika iegūts pie 60 bāru darba spiediena. Procesa beigās ekstrahētais paraugs tika izskalots, izmantojot šķīdinātāja tilpumu, kas vienāds ar 60% no ekstrakcijas šūnas tilpuma. Visbeidzot, paraugu iztīrīja 60 sekundes, izmantojot slāpekli zem spiediena (150 psi.), un ekstraktu savāca 60 ml stikla flakonā ar gumijas vāciņu, kas pārklāts ar teflonu. Savāktā ekstrakta tilpums bija no 25 līdz 31 ml atkarībā no ekstrakcijas šūnas iepakojuma blīvuma. Iegūto ekstraktu pārnes 50 ml mērkolbā un piepilda līdz tā tilpumam, izmantojot piemērotu šķīdinātāja tipu. Ar vienādiem nosacījumiem tika veiktas trīs neatkarīgas ekstrakcijas. Starp braucieniem sistēma tika mazgāta ar piemērotu ekstrakcijas šķīdinātāju.
Pētāmie PLE parametri bija šķīdinātāja tips (metanols, acetons un etilacetāts), temperatūra (50, 75, 100, 125 un 150 °C), laiks (5, 10, 15 un 20 min) un ekstrakcijas ciklu skaits (1– 5). PLE attaukošanas procesā par šķīdinātāju tika izmantots n- heksāns, un pētāmie parametri bija temperatūra (50 un 100 °C) un laiks (5 un 10 min) lipīdu noņemšana. Acetona un etilacetāta ekstraktus pirms hromatogrāfiskās analīzes iztvaicēja līdz sausam līmenim vakuumā un atkārtoti izšķīdināja metanolā.
Soksleta ekstrakcija
Izsmeļošas ekstrakcijas Soxhlet aparātā tika veiktas, izmantojot 2,0 g materiāla porcijas. Precīzi nosvērti paraugi tika pārnesti uz papīra uzpirksteņu. Ielādētais uzpirksteņa tika ievietots 100 ml Soxhlet ekstraktorā. Ekstrakcijas tika veiktas divsoļu procesā (n = 3). Procedūras pirmajā posmā augu materiāls tika attaukots 6 stundas, izmantojot 75 ml n-heksāna. Otrajā silimarīns tika ekstrahēts 5 h ar 75 ml metanola. Pēc atdzesēšanas līdz istabas temperatūrai iegūtais ekstrakts tika pārnests uz 100 ml mērkolbu, kas pēc tam līdz tilpumam tika piepildīta ar metanolu. Tika veiktas trīs neatkarīgas ekstrakcijas.
Ekstraktu hromatogrāfiskā analīze
HPLC mērījumus veica Dionex šķidruma hromatogrāfam (Dionex Corp.), kas sastāv no hromatogrāfijas kameras (LC20), kurā ir PEEK automatizēts iesmidzināšanas vārsts, kas aprīkots ar 10-μL parauga cilpu, gradienta sūkni (GP50), absorbcijas detektoru (AD25) un fotodiodes matricu detektoru (PDA100). Visa hromatogrāfijas sistēma bija PeakNet6 datu ieguves sistēmas kontrolē. Hromatogrāfiskā atdalīšana tika veikta 40 °C temperatūrā, izmantojot Prodigy ODS-2 kolonnu (5 μm, 250 × 4, 6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Kustīgā A fāze bija metanola maisījums ar fosforskābes ūdens šķīdumu, kas satur 0,5 ml 75% fosforskābes 100 ml šķīduma (35: 65, tilp./tilp.). Kustīgā B fāze bija metanola maisījums ar fosforskābes ūdens šķīdumu, kas satur 0,5 ml 75% fosforskābes 100 ml šķīduma (50: 50, tilp./tilp.). Plūsmas ātrums bija 0,8 ml/min. Analīzes tika veiktas kustīgās fāzes gradientā, kur B procentuālais daudzums A ir šāds: sākotnējā koncentrācija, 0%B; 28 min, 100%B; 35 min, 100%B, 36 min 0%B. Pirms nākamās analīzes kolonna tika līdzsvarota, izmantojot kustīgo fāzi, kas satur 0%B 20 min. Katrs ekstrakts tika analizēts ar HPLC trīs reizes. Viļņu garums flavonolignānu noteikšanai tika noteikts 288 nm, un maksimālā raksturojuma noteikšanai tika reģistrēti arī UV-Vis spektri no 210 līdz 500 nm.
Ekstraktu kvalitatīvo analīzi veica, salīdzinot pīķu aiztures laikus un to UV–Vis spektrus ekstraktos ar standartizētā sausā silimarīna parauga aiztures laikiem. Lai pagatavotu standartizētu sauso silimarīna šķīdumu, 50 ml metanola izšķīdina 0,02 g parauga, kas satur 5,0 mg silibīna A + B. Silihristīna, silīdidīna, silibīna A, silibīna B, izozilibīna A un B pīķi parādījās aiztures laikos attiecīgi 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 un 34,8 min. Kvantitatīvās analīzes pamatā bija silibīna B standarts, un tika izmantota ārējā standarta metode. No piecām savienojuma koncentrācijām 0,1–1,0 mg/ml koncentrācijas diapazonā tika izveidota kalibrēšanas līkne. Katrai standartš šķīduma koncentrācijai tika veikti trīs pīķa laukuma mērījumi. Iegūtās kalibrēšanas līknes raksturīgie parametri bija šādi: slīpums, 0,516 un krustpunkts, 0,003. Konstatēts, ka kalibrēšanas līkne testētajā koncentrācijas diapazonā ir lineāra. Tika konstatēts, ka korelācijas koeficients ir >0,995. Ņemot vērā grūtības iegādāties silihristīna, sildiabīna, silibīna A, izozilibīna A un B standartus, šo savienojumu daudzumus aprēķināja, saistot to hromatogrāfiskās reakcijas ar silibīna B kalibrēšanas līkni.
Statistiskā analīze
Visus datus izsaka kā vidējo ± standartnovirzi (SN). Dispersijas analīzi (ANOVA) un F testu izmantoja, lai novērtētu PLE apstākļu ietekmi uz silimarīna ražu. Vidējās vērtības tika uzskatītas par ievērojami atšķirīgām, ja salīdzināto parametru rezultāts atšķīrās pie P = 0, 05 nozīmības līmeņa. Lai pārbaudītu katra Fišera koeficienta nozīmīgumu, tika izmantotas P vērtības.
Rezultātus
1.a attēlā parādīta tipiska PLE ekstrakta hromatogramma, kas iegūta no S. marianum L. Gaertner augļiem, savukārt 1.b attēlā parādīta silimarīna ekstrakcijas hromatogramma no sagatavotā piena dadžu šķīduma, izšķīdinot standartizētu S. marianum L. Gaertner sauso ekstraktu metanolā (1 mg/ml). Analizējot PLE vai Soxhlet ekstraktu hromatogrammas ar standartizētā šķīduma hromatogrammām (aiztures laiki, UV–Vis spektri un maksimālās tīrības indekss), tika pierādīts, ka izmantotie hromatogrāfiskie apstākļi ļauj pietiekami izšķirt pārbaudītos savienojumus, pīķus, kas numurēti no 1 līdz 6, no parauga matricas sastāvdaļām. Pīķus noteica šādi: 1) silihristīns, 2) sildianīns, 3) silibīns A, 4) silibīns B, 5) izosilibīns A un 6 izozilibīns B.
Kā iegūt piena dadzis?
Atšķirībā no vairuma garšaugu, piena dadžu sēklas ne pārāk labi ekstrahē ūdenī, tāpēc nemēģiniet no tām pagatavot tasi tējas! Tā vietā ēdiet svaigas maltas sēklas vai iegūstiet labas kvalitātes kapsulu. Ja, izmantojot sēklas, nopērciet tās veselas un pēc tam sasmalciniet tās pēc vajadzības (es izmantoju kafijas dzirnaviņas, lai tās padarītu par rupju pulveri). Sēklas garšo taukainas, saldas un rūgtas - varbūt tās ir iegūta garša, bet tās vispār nav nepatīkamas. Sāciet ar 1/2 līdz 1 ēdamkaroti dienā, kas pārkaisa jūsu pārtikai, un skatiet, kā tas jūtas, pielāgojot summu, kā jums nepieciešams.
Sastāvdaļas
1 glāze remdena ūdens
1 glāze 100 pierādījums alkohols es izmantoju degvīnu
3/4 līdz 1 glāze piena dadžu sēklas, kas, ja iespējams, sasmalcinātas
Instrukcijas
Sterilizējiet Mason burku, ievietojot to verdošā ūdenī apmēram 10 minūtes vai novietojot to uz plaukta cepeškrāsnī apmēram 250 grādos 15 minūtes.
Ielejiet visas sastāvdaļas Mūra burkā.
Uzlieciet burkai jaunu vāku un cieši pieskrūvējiet to ar gredzenu.
Burku enerģiski krata apmēram 1 minūti.
Ielieciet burku vēsā, tumšā vietā piecas nedēļas.
Katru dienu sakratiet burku, lai nodrošinātu, ka piena dadžu sēklas nepeld uz augšu un pilnībā iepildiet ar alkoholu un ūdeni.
Noteiktā nedēļu skaita beigās izkāš piena dadzis prom no šķidruma caur smalku acu sietu – turot šķidrumu. Ja jums nav smalka acu sieta, izmantojiet nelielu caurduri un/vai izvelciet caurduri ar vairākiem kafijas filtriem, lai samazinātu atveru izmēru.
Cik ilgi piena dadzis stājas spēkā?
Piena dadžu sēklas var aizsargāt aknu šūnas no toksiskām ķīmiskām vielām un zālēm. Šķiet, ka tam ir arī cukura līmeni pazeminoša, antioksidanta un pretiekaisuma iedarbība.
Oksidatīvā stresa parametru uzlabošanās tika konsekventi novērota sešu mēnešu ārstēšanas laikā ar specializētu piena dadžu piegādes sistēmu (2). Oksidatīvā stresa modeļu uzlabošanās ir atbildīga par insulīna signalizēšanas un aknu šūnu darbības uzlabošanos.
Cik ilgi jālieto piena dadzis? (Piena dadžu DEVA)
Piena dadzis tiek uzskatīts par drošu devās 420 mg/ dienā iekšķīgi dalītās devās līdz 41 mēnesim. Viens avots liecina, ka dienas devas no 12 līdz 15 g sausu augļu dispepsijas un žults sistēmas traucējumu ārstēšanai, bet ekstrakts, kas satur 200 līdz 400 mg silimarīna dienā, tiek uzskatīts par efektīvu dažādu aknu darbības traucējumu gadījumā.
Piena dadžu priekšrocības
1. Atbalsta aknu veselību
Viens no visbiežāk izmantotajiem piena dadžu lietojumiem ir aknu darbības traucējumu ārstēšana. 2016. gada pētījumā tika konstatēts, ka piena dadzis uzlaboja uztura izraisītus aknu bojājumus pelēm. Ir vajadzīgi papildu pierādījumi, lai pierādītu, ka piena dadzis tādā pašā veidā dod labumu cilvēka aknām. Tomēr pētnieki to dara. Piena dadzis aktīvā viela silymarin darbojas kā antioksidants, samazinot brīvo radikāļu ražošanu. Zinātnieki domā, ka tas rada detoksikācijas efektu, tāpēc piena dadzis var būt izdevīgs aknu problēmām.
Tomēr, kamēr nav veikti papildu pētījumi, piena dadzis nav ieteicams kā primārā ārstēšanas iespēja aknu darbības traucējumiem. Bet tas var būt noderīga papildu ārstēšana, lai mēģinātu.
2. Veicina ādas veselību
Piena dadžu eļļu var lietot lokāli, lai uzlabotu ādas veselību.
Piena dadzis var palīdzēt veicināt veselīgu ādu. 2015. gada pētījumā tika konstatēts, ka piena dadzis palīdzēja uzlabot iekaisuma ādas apstākļus, ja to uzklāj uz peles ādas.
Citā pētījumā tika konstatēts, ka piena dadzis laboratorijas vidē ir arī antioksidants un pretnovecošanās iedarbība uz cilvēka ādas šūnām.
Ir nepieciešami turpmāki pētījumi par cilvēkiem, lai noteiktu, kādus ieguvumus cilvēks var sagaidīt, uzklājot piena dadzis uz savas ādas.
3. Samazina holesterīna līmeni
Augsts holesterīna līmenis var izraisīt problēmas ar sirds veselību un palielināt cilvēka insulta iespēju.
2006. gada pētījums liecina, ka piena dadzim var būt svarīga loma holesterīna līmeņa pazemināšanā. Tā konstatēja, ka holesterīna līmenis bija zemāks cilvēkiem, kas lieto piena dadzis, lai ārstētu diabētu, nekā tiem, kas lieto placebo.
4. Atbalsta svara zudumu
Sākotnējā pētījumā ar dzīvniekiem, kas tika veikti 2016. gadā, tika konstatēts, ka silimarīns izraisīja svara zudumu pelēm, kuras tika barotas ar diētu, kas paredzēta svara pieaugumam.
Tas liecina, ka piena dadzis var būt izdevīgs tiem, kas vēlas zaudēt svaru. Tomēr, lai to apstiprinātu, ir nepieciešams vairāk pētījumu par piena dadžu ietekmi uz svara zudumu cilvēkiem.
5. Samazina insulīna rezistenci
Pētījumā ar pelēm konstatēja, ka piena dadžu ekstrakts palīdzēja samazināt insulīna rezistenci. Insulīna rezistence ir problēma cilvēkiem ar 2. tipa cukura diabētu.
Lai gan šis pētījums liecina, ka piena dadzis varētu spēlēt lomu diabēta ārstēšanā, ir nepieciešams vairāk pētījumu, lai apstiprinātu, vai piena dadzis samazina insulīna rezistenci un atbalsta diabēta pārvaldību.
6. Uzlabo alerģiskos astmas simptomus
Piena dadzis aktīvā viela var palīdzēt samazināt iekaisumu. 2012. gada pētījumā tika konstatēts, ka silimarīns palīdzēja aizsargāt pret iekaisumu pelēm ar alerģisku astmu elpceļos.
Ir nepieciešams vairāk pētījumu, lai redzētu, vai silymarin nāk par labu astmas simptomiem cilvēkiem.
7. Ierobežo vēža izplatīšanos
Piena dadzis var palīdzēt apturēt dažu vēža veidu izplatīšanos. 2016. gada pārskatā tika konstatēts, ka piena dadžu ekstrakts kavēja vēža šūnu augšanu kolorektālā vēža gadījumā.
Ir nepieciešams vairāk pētījumu, lai noteiktu, kā piena dadzis var tikt izmantots, lai palīdzētu cīnīties pret vēzi.
8. Atbalsta kaulu veselību
Piena dadžu tēja var palīdzēt novērst kaulu zudumu, ko izraisa estrogēna trūkums. Piena dadzis var spēlēt būtisku lomu kaulu veselības atbalstīšanā. 2013. gada pētījumā tika konstatēts, ka piena dadzis palīdzēja novērst kaulu zudumu. Pētījumā īpaši aplūkoja kaulu zudumu, ko izraisīja estrogēna deficīts. Vēl nav skaidrs, vai piena dadzis ir vienlīdz izdevīgs kaulu zudumam ar citu iemeslu. Ir nepieciešami papildu pētījumi, pirms var droši secināt, ka piena dadzis atbalsta kaulu veselību cilvēkiem.
9. Uzlabo izziņu
2015. gada pētījumā tika konstatēts, ka piena dadzis palielināja izturību pret oksidatīvo stresu. Oksidatīvais stress ir potenciāls Alcheimera slimības cēlonis.
Tādā veidā piena dadzis var palīdzēt uzlabot izziņu un ārstēt deģeneratīvos apstākļus, kas ietekmē prātu. Ir nepieciešams vairāk pētījumu par cilvēkiem, lai apstiprinātu piena dadzis ietekmi uz izziņu.
10. Uzlabo imūnsistēmu
Piena dadzis var palīdzēt stiprināt cilvēka imūnreakciju un palīdzēt viņiem cīnīties pret infekciju.
2016. gada pētījumā par dzīvnieku modeli tika konstatēts, ka piena dadžu ekstrakts uzlaboja imunitāti, kad to patērē. Senā pētījumā tika konstatēts, ka piena dadžu ekstrakts pozitīvi ietekmēja imūnreakciju cilvēkiem.
Ir nepieciešams vairāk pētījumu ar cilvēkiem, pirms zinātnieki var droši teikt, ka piena dadzis uzlabo cilvēka imūnsistēmu.
Piena dadzis blakusparādības
Piena dadzis, šķiet, ir maz blakusparādību, pat ja to lietoju vairākus gadus. Dažiem cilvēkiem ir slikta dūša, caureja, nieze un vēdera uzpūšanās.
Par beztaras piena dadžu pulveri, lūdzu, sazinieties ar mumsherbext@undersun.com.cn
Atsauces:https://academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
